Několik enzymů běžně používaných v experimentech PCR

Polymerázová řetězová reakce, zkráceně jakoPCRv angličtině je technika molekulární biologie používaná k amplifikaci specifických fragmentů DNA.Lze to považovat za speciální replikaci DNA mimo tělo, která může značně zvýšit velmi malé množství DNA.Během celéhoPCRV procesu reakce hraje zásadní roli jedna třída látek – enzymy.

1. Taq DNA

V experimentech v prvních dnechPCR, vědci použili Escherichia coli DNA polymerázu I. S tímto enzymem je však problém: potřebuje doplňovat nový enzym pokaždé, když se provede cyklus, což trochu komplikuje operační kroky a je obtížné ho plně automaticky zesílit.Tento problém byl vyřešen poté, co vědci v roce 1988 náhodně izolovali Taq DNA polymerázu z Thermus aquaticus. Od té doby se automatická amplifikace DNA stala realitou.Objev tohoto enzymu také děláPCRtechnologie pohodlná, praktická a univerzální technologie.V současnosti je Taq DNA polymeráza nejběžnější polymerázou v DNA kitech.

2. PfuDNA

Jak již bylo zmíněno výše, Taq DNase má velkou chybu, takže vědci do určité míry modifikovali Taq DNA polymerázu, aby se vyhnuli nespecifické amplifikaci kvůli nesprávnému párování, což má za následek nepřesné výsledky testů.Ale modifikace Taq DNA polymerázy může inhibovat aktivitu DNA polymerázy při pokojové teplotě.PfuDNA polymeráza může dobře kompenzovat výše uvedené nevýhody Taq DNA polymerázy, takže PCR reakce může být prováděna normálně a úspěšnost amplifikace cílového genu může být účinně zlepšena.

3. Reverzní transkriptáza

Reverzní transkriptáza byla objevena v roce 1970. Tento enzym využívá RNA jako templát, dNTP jako substrát, řídí se principem párování bází a syntetizuje jednovláknovou DNA komplementární k templátu RNA ve směru 5′-3′.Reverzní transkriptáza je primárně závislá na aktivitě DNA polymerázy z templátů DNA nebo RNA, a proto nemá žádnou 3′-5′ exonukleázovou aktivitu.Má však aktivitu RNázy H, která do určité míry omezuje délku syntézy reverzní transkriptázy.Kvůli nízké věrnosti a termostabilitě divoké reverzní transkriptázy ji vědci také upravili.

ProPCRexperimenty, hlavní spotřební materiál je: jednotlivá zkumavka pro PCR, zkumavka pro PCR se 4/8 stripy, destičky pro PCR.

LabioviSpotřební materiál pro PCRmít následujícívýhod:

PCR destičky: Široká kompatibilita termocykleru;Vysoký kontrast, snadná identifikace;dobře fluorescenční odraz; dobrýpřenos tepla;Certifikované inhibitory DNázy, RNázy, DNA, PCR a testované bez pyrogenů.

Jednotlivé PCR zkumavky: Odolný proti odpařování, dobrýpřenos tepla;vynikající optická čirost; certifikovaná DNáza, RNáza, DNA, inhibitory PCR a testováno bez pyrogenů.

4/8-proužkové PCR zkumavky: Ultratenké stěny, vysoká čistota, dobrá odrazivost fluorescence;lze použít ve farmaceutickém průmyslu, potravinářském průmyslu a molekulární biologii; vysoce kvalitní, panenský PP materiál; certifikované inhibitory DNázy, RNázy, DNA, PCR a testované bez pyrogenů.